超分辨顯微鏡的技術(shù)原理主要涉及光在樣品表面的散射和熒光標(biāo)記物的激發(fā)與發(fā)射。這些技術(shù)能夠突破光學(xué)顯微鏡的衍射極限,實(shí)現(xiàn)更高的分辨率。
其中,STED(受激發(fā)射損耗)顯微鏡是一種常用的超分辨顯微鏡技術(shù)。STED的基本原理是使用雙光源,其中一個(gè)光源激發(fā)熒光團(tuán)發(fā)出熒光,而另一個(gè)光源通過(guò)受激發(fā)射過(guò)程抑制熒光團(tuán)的發(fā)射,從而產(chǎn)生超分辨率圖像。該技術(shù)的關(guān)鍵在于通過(guò)精確控制激光束的聚焦和強(qiáng)度分布,使得只有中心區(qū)域的熒光團(tuán)被激發(fā)和發(fā)射,而外圍區(qū)域的熒光團(tuán)則被抑制,從而實(shí)現(xiàn)更高的分辨率。
另外,STORM(隨機(jī)光學(xué)重構(gòu)顯微鏡)也是另一種超分辨顯微鏡技術(shù)。STORM技術(shù)通過(guò)控制熒光標(biāo)記物的隨機(jī)開(kāi)關(guān)狀態(tài),使得只有一小部分標(biāo)記物在特定時(shí)間處于活躍狀態(tài),從而在空間上形成高密度的熒光點(diǎn)陣列。通過(guò)精確控制熒光標(biāo)記物的激發(fā)和發(fā)射,可以重構(gòu)出高分辨率的顯微圖像。
總的來(lái)說(shuō),超分辨顯微鏡技術(shù)利用光與物質(zhì)的相互作用以及熒光標(biāo)記物的特性,突破了傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡的限制,實(shí)現(xiàn)了更高的分辨率和更豐富的圖像信息。這些技術(shù)廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、材料科學(xué)等領(lǐng)域,為研究微觀世界提供了更深入的視角。